O Chaperone Plasmid Set consiste em cinco plasmídeos diferentes, cada um dos quais é projetado para expressar múltiplas chaperonas moleculares que funcionam como uma “equipe de chaperone” para permitir o dobramento de proteínas. A co-expressão de uma proteína alvo com uma dessas equipes de chaperonas aumenta a recuperação de proteínas solúveis. Cada plasmídeo carrega uma origem de replicação derivada de pACYC e um gene Cm r , que permite o uso com sistemas de expressão de E. coli utilizando plasmídeos do tipo ColE1 contendo um gene de resistência à ampicilina como marcador. Os genes chaperone estão situados a jusante de um araB ou Pzt-1(tet) promotor. Portanto, a expressão de proteínas alvo e chaperonas pode ser induzida individualmente se o gene alvo for colocado sob o controle de outros promotores (por exemplo, lac ). Esses plasmídeos também contêm o regulador necessário ( araC ou tetr ) para cada promotor.
Use este conjunto para realizar um método de duas etapas para construir sistemas de co-expressão de alvo/chaperona: Na primeira etapa, prepare um hospedeiro E. coli transformado apenas com o plasmídeo chaperona. O segundo passo é preparar células competentes a partir desta nova estirpe e transformar esta estirpe com um plasmídeo que expressa a proteína alvo.
