Este kit é baseado no método de detecção ELISA de sanduíche com duplo anticorpo e leva 4 horas para o ensaio. A microplaca fornecida neste kit já vem pré-revestida com anticorpo anti-NF-κB p65. Adicione o padrão e a amostra devidamente diluída nos poços correspondentes, respectivamente. Após a incubação, lave os componentes não ligados. Adicione o anticorpo de detecção biotinilado. Este anticorpo se ligará ao NF-κB p65 ligado ao anticorpo pré-revestido. Lave os componentes não ligados e adicione o conjugado HRP-estreptavidina (SABC). Lave os componentes não ligados novamente e adicione a solução de substrato TMB. O TMB é catalisado pela HRP para produzir um produto de cor azul que se torna amarelo após a adição da solução de parada. Leia a absorbância a 450 nm em um leitor de microplacas. Calcule a concentração de NF-κB p65 na amostra construindo uma curva padrão. A concentração da substância alvo é proporcional ao valor de DO450.
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