2-D Quant Kit
O 2-D Quant Kit foi desenvolvido para a determinação precisa da concentração de proteínas em amostras preparadas para técnicas de eletroforese, como eletroforese 2-D, SDS-PAGE ou IEF.
- Determinar com precisão a concentração de proteína na presença de 2% de SDS, 1% de DTT, 8 M de ureia, 2 M de tiouréia, 4% de CHAPS, 2% de Pharmalyte e 2% de tampão IPG.
- Precipita quantitativamente as proteínas, deixando para trás substâncias interferentes.
- Resposta linear na faixa de 0 a 50 ug de proteína, com volumes de amostra recomendados de 1 a 50 μl.
Os métodos espectrofotométricos comuns de quantificação de proteínas dependem da ligação do corante Coomassie ou da redução catalisada por proteína de íon cúprico (Cu2+) para íon cuproso (Cu+). Os ensaios de ligação de corante não podem ser usados na presença de qualquer reagente que também se ligue ao corante. Isso inclui anfólitos e detergentes como PlusOne CHAPS, SDS e Triton X-100. Ensaios que dependem da redução do íon cúprico não podem ser usados na presença de redutores como o DTT, ou na presença de reagentes que formam complexos com o íon cúprico, como a tioureia ou o EDTA.
O procedimento do 2-D Quant Kit funciona precipitando quantitativamente as proteínas, deixando para trás as substâncias interferentes. O ensaio é baseado na ligação específica de íons de cobre à proteína. As proteínas precipitadas são ressuspensas em uma solução contendo cobre e o cobre não ligado é medido com um agente colorimétrico. A absorbância em 480 nm está inversamente relacionada à concentração de proteína. O ensaio tem uma resposta linear à proteína na faixa de 0 a 50 ug e o volume de amostra recomendado é de 1 a 50 ul.
Reagentes testados para compatibilidade com o kit 2-D Quant
Composto testado: Concentração SDS: 2% (p/v) CHAPS: 4% (p/v) Triton X-100: 1% (p/v) Pharmalyte pH 3-10: 2% (v/v) pH do tampão IPG 3-10 NL: 2% (v/v) Tris: 50 mM EDTA: 10 mM DTT: 1% (65 mM) 2-Mercaptoetanol: 2% (v/v) Ureia: 8 M Tiorea: 2 M Glicerol: 30 % (p/v).
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| Parâmetro | 2-D Quant Kit |
|---|---|
| Volume de amostra mín. | 1 ul |
| Volume de amostra máx. | 50 ul |
| Condições do ensaio | 480 nm 1 h |
| Linearidade | 0 – 50 ug |
| Condições de armazenamento | 2 – 8°C |
| Conteúdo do kit | Precipitante 250 ml Coprecipitante 250 ml Solução de cobre 50 ml Reagente de cor A 2 x 250 ml Reagente de cor B 5 ml Padrão BSA 5 ml (2 mg/ml) |
| Parte Molhada | Não |
| Guia | O kit é usado para quantificação da quantidade de proteína usando um ensaio colorimétrico. O kit contém reagentes suficientes para 500 ensaios individuais |
| Aprovado pela DIGE | Y |
| Tamanho do pacote | 500 ensaios |
![Tris ([hydroxymethyl] aminoethane), 500 g](https://sinapsebiotecnologia.com.br/wp-content/uploads/2021/08/5573_50054-300x300.jpg)
