Hi-Fi PCR Master Mix (2X), 1mL
Hi-Fi PCR Master Mix (2X) usa DNA polimerase de alta fidelidade, a taxa de amplificação pode chegar a 15s / kb, contém 2X Hi-Fi DNA polimerase, 2X PCR Buffer (com Mg2 +), 2X dNTP, só precisa adicionar a quantidade certa de primers, modelos e água para realizar a amplificação de PCR de alta fidelidade. A operação de PCR é bastante simplificada, a operação é mais rápida, a poluição que pode ser causada durante a operação de PCR é reduzida e a repetibilidade do PCR é melhor.
O produto pode realizar uma variedade de amplificação de PCR convencional e é particularmente adequado para amplificação de PCR qualitativa e semiquantitativa rápida e de alta fidelidade, bem como para a amplificação de longos fragmentos de DNA (até 12kb de comprimento).
A velocidade de amplificação é extremamente rápida. Quando a amplificação de fragmentos de DNA menores que 6kb, a extensão de 1kb leva apenas 15 segundos. O alongamento normal da DNA polimerase de 1kb geralmente leva de 1 a 2 minutos. Sua probabilidade de erro é 52 vezes menor que a da enzima Taq e 6 vezes menor que a da enzima pfu.
Este produto tem alta estabilidade e não tem efeito significativo na amplificação de PCR após congelamento e descongelamento repetidos por 15 vezes.
Para o sistema de reação PCR de 50 microlitros, o tamanho de 1mL é suficiente para 40 amostras; Para 20 microlitros de sistema de reação PCR, suficiente para 100 amostras.
- Tamanho
- 1mL
- Armazenamento
- O kit deve ser armazenado a -20°C por pelo menos um ano. Evite congelamento e descongelamento repetidos. Para uso frequente, a quantidade apropriada pode ser armazenada a 4°C por pelo menos 3 dias.
- Procedimento de ensaio
- 一. O sistema de reação PCR foi criado:
1. Derreta e misture as soluções necessárias para a reação de PCR. Coloque o Hi-Fi PCR Master Mix (2X) em um banho de gelo ou em uma caixa de gelo.
2. Consulte a tabela abaixo para configurar o sistema de reação de PCR em condições de banho de gelo.
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Reagentes Concentração final volume (μL) volume (μL) água destilada dupla ou água Milli-Q – 21-x 8,4 anos DNA do modelo 10pg-1μg x e Mistura de primer (10μM cada) 0,8μM 4 1.6 Mistura mestre de PCR Hi-Fi (2X) 1X 25 10 Volume total – 50 20 Nota: A dosagem recomendada de volume de reação de 50μl para diferentes tipos de modelos é a seguinte:DNA genômico de mamíferos: 0,1-1μg; DNA genômico de Escherichia coli: 10-100ng; DNA plasmidial: 0,1-10ng.
- 3. Sopre suavemente e misture com uma pipeta, centrifugue em temperatura ambiente por alguns segundos.
- 4. Coloque o líquido de reação de PCR no instrumento de PCR para iniciar a reação de PCR.
- 二.A configuração dos parâmetros de reação de PCR pode ser referida da seguinte forma:
- PASSO 1 (desnaturação inicial): 92 °C 3min PASSO 2 (desnaturação): 92 °C 30 seg PASSO 3 (recozimento): 55 °C 30 seg PASSO 4 (extensão): 68 °C 15-60s / kb PASSO 5 (ciclo): Vá para o PASSO 2 por 30-35 ciclos PASSO 6 (extensão final): 68 °C 10min PASSO 7 (armazenamento temporário): 4 °C para sempre
- Nota: O tempo da etapa de extensão precisa ser definido de acordo com o comprimento do produto PCR. Para a amplificação de fragmentos de DNA menores que 6kb, o tempo de extensão recomendado é de 15 segundos por kb. Ao amplificar fragmentos de DNA maiores que 6kb, o tempo de alongamento recomendado é de 1 minuto por kb.
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