HisTALON Gravity Column Purification Kit, 5 x 1 mL Columns
R$6.779,03
TALON Metal Affinity Resin é uma resina durável de cromatografia de afinidade de metal imobilizado (IMAC) que possui uma notável afinidade e especificidade para proteínas marcadas com his. A resina TALON é compatível com todos os reagentes IMAC comumente usados e permite a purificação de proteínas sob condições nativas ou desnaturantes.
Além disso, essa resina usa íons de cobalto para purificar proteínas recombinantes marcadas com his. TALON é um quelante tetradentado carregado com cobalto e é específico para proteínas marcadas com his. O núcleo reativo TALON, contendo cobalto, possui requisitos rigorosos para o posicionamento espacial das histidinas. Apenas histidinas adjacentes ou histidinas vizinhas especialmente posicionadas são capazes de ligar o cobalto neste núcleo reativo. Em resinas à base de níquel (ou seja, Resina Ni-NTA), esses requisitos espaciais são menos rigorosos. Portanto, as resinas à base de níquel também são capazes de ligar histidinas localizadas em outros locais além do his-tag da proteína.
Disponível por encomenda
Escolha de condições de purificação nativas ou desnaturantes
A resina TALON mantém sua especificidade de ligação a proteínas e rendimento sob uma variedade de condições de purificação. É estável sob condições desnaturantes e nativas (não desnaturantes). A decisão de usar condições de purificação nativas ou desnaturantes depende da localização da proteína, solubilidade, acessibilidade da tag his, aplicações a jusante e a necessidade de preservação da atividade biológica.
- Condições nativas
A purificação de uma proteína em condições nativas é a maneira mais eficiente de preservar sua atividade biológica, mas requer que a proteína seja solúvel. As vantagens incluem:- Eliminando a etapa de renaturação no final da purificação, economizando tempo e evitando perda significativa de atividade
- Mantendo a capacidade de copurificar subunidades enzimáticas, cofatores e proteínas associadas
- Condições de desnaturação
Como as proteínas que são superexpressas em sistemas procarióticos às vezes formam agregados insolúveis chamados corpos de inclusão, pode ser necessário purificar as proteínas sob condições desnaturantes – usando desnaturantes fortes, como guanidínio 6 M ou ureia 8 M para aumentar a solubilidade da proteína. As vantagens incluem:- Solubilização completa de corpos de inclusão e proteínas marcadas com his
- Ligação melhorada à matriz e ligação não específica reduzida, devido à exposição total da tag his
Proteínas marcadas com His purificadas sob condições desnaturantes podem ser usadas diretamente em aplicações subsequentes ou podem precisar ser renaturadas e redobradas. A renaturação e redobragem de proteínas podem ser realizadas antes da eluição da coluna. No entanto, os rendimentos de proteínas recombinantes serão menores do que em condições nativas, porque as moléculas de uréia e guanidínio competem com as histidinas pela ligação ao metal.
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