Propriedades
- Concentração de 5 U/ul;
- Hot-start, ativado por uma etapa de incubação de 15 min a 95°C;
- A taxa de erro por nucleotídeo por ciclo é de aprox. 2,5 x 10 -5;
- A precisão é app. 4 x 10 4;
- Tampão de armazenamento e diluição: glicerol a 50% (v / v), Tris-HCl 20 mM pH;
- Purificado de uma cepa de E. coli que carrega um plasmídeo superprodutor contendo um gene modificado de Thermus aquaticus DNA Polimerase.
Reagentes
- HOT FIREPol DNA Polimerase (5 U/ ul) em Tris-HCl 20 mM pH 8,7 a 25ºC, KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, glicerol 50% (v / v) e estabilizantes.
- HOT FIREPol 10x Tampão B2 (sem Mg 2+ ): Tris-HCl a 0,7, 0,175 M (NH 4 ) 2 SO 4 , 0,2% w / v de Tween-20.
- 10x Buffer B2 que contém detergente não iônico que suprime os efeitos inibitórios do traço de tampões de extração de DNA e aumenta o rendimento e a eficiência da PCR.
- MgCl 2 25 mM;
- 10x Solution S é um aditivo que facilita a amplificação de modelos difíceis (por exemplo, modelos de DNA ricos em GC).
Esta solução deve ser usada em uma concentração final definida (solução 1x, 2x ou 3x). A solução 10x S NÃO é um tampão de reação e deve ser usada SOMENTE SE ocorrer uma amplificação não específica.
Referências:
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Thomas Mikeska 1, Christoph Bock, Osman El-Maarri, Anika Hübner, Denise Ehrentraut, Johannes Schramm, Jörg Felsberg, Philip Kahl, Reinhard Büttner, Torsten Pietsch, Andreas Waha
.Optimization of quantitative MGMT promoter methylation analysis using pyrosequencing and combined bisulfite restriction analysis. J Mol Diagn. 2007 Jul;9(3):368-81. doi: 10.2353/jmoldx.2007.060167.
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