Substrato cromogênico mais sensível para detecção de peroxidase, mais sensível que ABTS e OPD. Ele desenvolve uma cor azul profunda na presença de conjugados marcados com peroxidase mensuráveis a 650 nm. Torna-se amarelo quando interrompido por acidificação e lido a 450 nm. Recomendado para ELISA. O TMB também pode ser usado em aplicações de blotting com a compra do KPL TMB Membrane Enhancer.
Formato de dois componentes de 3, 3 ‘, 5, 5’ – tetrametilbenzidina, basta misturar e usar. Tem vida útil mais longa do que substratos TMB de um componente.