ProteinSafeTM Protease Inhibitor Cocktail (100×) [1 ml]
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ProteinSafeTM Coquetel Inibidor de Protease (100x) é uma mistura pronta para uso de sete inibidores de protease (AEBSF, Aprotinina, Bestatina, E-64, Leupeptina, Pepstatina A e EDTA) que foi otimizada para proteger proteínas da digestão por proteases endógenas, incluindo serina protease, cisteína protease, aminopeptidase, ácido aspártico protease e metaloprotease. Este coquetel é adequado para uso em purificação de proteínas, Western Blot, Co-IP, ChIP, ensaios de atividade de proteína quinase, etc. Ele contém um componente separado de EDTA, que é incompatível com algumas aplicações posteriores (por exemplo, ensaios de proteínas, eletroforese 2D, etc.). O EDTA pode ser adicionado ao tampão de lise celular se necessário como inibidor de metaloprotease.
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FlyCut HindIII é expresso e purificado a partir de E. coli que carrega o gene HindIII recombinante. Seu peso molecular é de 35,8 kDa, com o local de reconhecimento em A ^ AGCTT. A reação é conduzida por 5-15 minutos a 37 ℃ e inativada pelo calor a 65 ℃ por 20 minutos. Esta enzima não é sensível à metilação dam, dcm ou CpG de mamíferos.
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RNAhold é uma solução aquosa de preservação de tecidos não tóxica. Ele pode inativar a RNase e manter o RNA intacto permeando células e tecidos. Células e tecidos podem ser armazenados nesta solução por uma semana à temperatura ambiente sem degradação do RNA. Pode ser usado para preservação de RNA com bactérias, células e a maioria dos tecidos animais frescos.
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FlyCut BamHI é expresso e purificado de E. coli, que carrega o gene BamHI recombinante. Seu peso molecular é 27,5 kDa, com o local de reconhecimento em G ^ GATCC. A reação é conduzida por 5-15 minutos a 37 ℃ e inativada pelo calor a 80 ℃ por 20 minutos. Esta enzima não é sensível à metilação dam, dcm ou CpG de mamíferos.
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Este produto é adequado para isolar miRNA e RNA total de células, tecidos, sangue fresco e exossomos. Após as amostras serem lisadas com tampão de lise, a adição de clorofórmio à amostra lisada separa a solução para uma fase aquosa incolor superior contendo RNA, uma interfase e uma fase orgânica rosa inferior. Após a adição de etanol à fase aquosa transferida, o RNA total pode ser imobilizado especificamente por uma coluna de rotação de RNA. Ao ajustar o volume de etanol adicionado à fase aquosa, RNAs grandes (incluindo 28S rRNA, 18S rRNA e mRNA) são imobilizados enquanto RNAs pequenos (≤ 200 nt, como miRNA, siRNA, shRNA, snRNA, etc.) fluxo através do qual é passado através de uma coluna de spin de miRNA onde os miRNAs ficam imobilizados após a adição de mais etanol.