Nota A concentração ótima para RNase A é de 1-100 ug/ml, dependendo da aplicação. |
A enzima é ativa sob uma grande variedade de condições de reação. Em baixas concentrações de sal (NaCl 0 a 100 mM), a RNase A cliva o RNA de cadeia simples e de cadeia dupla, bem como a cadeia de RNA em híbridos de RNA-DNA. No entanto, em concentrações de NaCl de 0.3M ou superior, a RNase A cliva especificamente o RNA de cadeia simples. |
RNase A (Lyophilized Powder), 100mg
R$319,44
RNase A
N9046 (100MG)
Atividade específica: >2.500 u/mg proteínas (>units/mg proteínas)
Formato: contém 100mg de RNase A liofilizada.
Armazenar em temperatura ambiente por até um ano. Para um período maior armazenar em 4°C.
Descrição
RNase A, livre de DNase e proteases é uma endoribonuclase que degraga especificamente fitas únicas de RNA, clivando as ligações de fosfodiéster entre 5’ ribose do nucleotídeo e o grupo fosfato anexado a 3’ ribose de um nucleotídeo de pirimidina adjacente. O 2′, 3′-fosfato cíclico resultante é hidrolisado ao 3′ nucleosídeo fosfato correspondente.
Aplicações
Preparação de DNA genomico e plasmídeos
Remoção do RNA a partir de amostras de proteína recombinante
Ensaios de proteção à ribonuclease
Mapeamento de mutações de uma única base de DNA ou RNA
Controle de Qualidade
A ausência de endodesoxirribonucleases, exodeoxiribonucleases e proteases foi confirmada por testes de qualidade adequados. Funcionalmente testadas para a digestão de RNA em um procedimento de purificação de DNA plasmidial.
Fonte
Pâncreas bovino.
Peso Molecular
13,7 kDa monómero.
Definição de Atividade por Unidade
Uma unidade da enzima provoca um aumento na absorbância de 1,0 a 260nm quando RNA de levedura é hidrolisado a 37°C e pH 5.0
Cinquenta unidades equivalem a aproximadamente equivalente a 1 unidade de Kunitz
Inibição e Inativação
Inibidores: O inibidor mais potente é uma proteína de ~50 kDa a partir de citosol de células de mamíferos, por exemplo, RiboLock™ RNase inibidor.
Outros inibidores: uridina 2′, 3′ vanadato cíclico, 5′-difosfoadenosina 3′-fosfato e 5′-difosfoadenosina 2′-fosfato (2), SDS, dietil pirocarbonato, guanidínio tiocianato 4M mais 0,1 M de 2-mercaptoetanol e íons de metais pesados. Inativado por extração com fenol / clorofórmio.
Inativado por extração com fenol/clorofórmio.
Inativado por aquecimento a 95°C durante 10 minutos.
Disponível por encomenda
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Armazenamento: guarde a 4ºC por até 2 anos.
Protocolo
1. Preparar 100 ml de solução de gel de agarose (concentração de 0,8 a 2%) e misturar completamente. Coloque o frasco no microondas, aqueça até que a solução esteja completamente limpa e não haja partículas flutuantes pequenas visíveis (cerca de 2 ~ 3 minutos).
2. Adicione 2-5μl de DSViewTM à solução de gel. Agite o frasco suavemente para misturar a solução e evite formar bolhas.
3. Enquanto a solução de gel esfria, despeje-a na bandeja de gel até que os dentes do pente estejam imersos cerca de 1/4 ~ 1/2 na solução de gel.
4. Permitir o gel de agarose esfriar até solidificado. Coloque amostras no gel e corra a eletroforese.
5.Detectar as bandas sob iluminação UV.
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2-5 ul /poçoConcentração
Bandas em evidência 100 ng /5ul
Outras bandas 40 ng /5ulCondição de eletroforese recomendada
8 cm, Gel de Agarose a 1%, 1 × TAE, 7 V / cm, 45min.Conteúdo (bp)
500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000.
Concentração
92 ng /ul
Armazenar
Estável por 3 meses em temperatura ambiente, para armazenamento de longo prazo, armazene a -20 ℃.