FlyCut HindIII é expresso e purificado a partir de E. coli que carrega o gene HindIII recombinante. Seu peso molecular é de 35,8 kDa, com o local de reconhecimento em A ^ AGCTT. A reação é conduzida por 5-15 minutos a 37 ℃ e inativada pelo calor a 65 ℃ por 20 minutos. Esta enzima não é sensível à metilação dam, dcm ou CpG de mamíferos.