BCA Protein Assay Kit, 100T
O ensaio de proteína BCA é uma formulação de determinação de proteína baseada em ácido bicinchonínico (BCA) para a detecção colorimétrica. Este método combina a redução de Cu2+ a+ por proteína em meio alcalino (a reação do biureto) e o produto da reação solúvel de cor púrpura da complexação de+ e BCA. Este complexo de cor púrpura exibe uma absorbância máxima a 562 nm que é quase linear com concentrações crescentes de proteína em uma ampla faixa de trabalho (0-2 mg / ml). De acordo com a alta sensibilidade e simplicidade de uso, o ensaio de proteína BCA é adotado por laboratórios e empresas e se torna um dos métodos quantitativos de proteínas anteriores, bem como o ensaio de Bradford.
O Kit de Ensaio de Proteína BCA Fina tem as características de alta sensibilidade e fundo de luz, e a faixa medida pode ser de até 3 mg/ml.
- Código do produto
- K001-100T
- Conteúdo do kit
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Tempos de extração 100T 500T 2500T Armazenamento Eu. Reagente A 20 ml 100 ml 500 ml RT II. Reagente B 1 ml 5 ml 25 ml RT III. BSA (5 mg / ml) 0,4 ml 2 ml 10 ml –20°C - Armazenamento
- Armazenar em temperatura ambiente por um ano, exceto BSA a -20 ° C.
- Procedimento
- 1.96-Procedimento de microplaca
(1) Prepare o reagente de trabalho. O reagente de trabalho, líquido claro na cor verde amarelo, é misturado com o Reagente A e o Reagente B na proporção de 50:1.
(2) Prepare o reagente padrão. Diluir o padrão BSA de 5 mg/ml em concentrações laterais de 0, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2 mg/ml. As diluições de BSA podem ser congeladas e armazenadas a –20 °C e descongeladas e aquecidas à temperatura ambiente quando usadas.
(3) Marque os poços com Padrão ou Teste. Adicione pelo menos 20 μl do Reagente Padrão diluído a cada poço Padrão e adicione o mesmo volume de amostras de teste em cada poço de teste.
(4) Adicione todos os poços com 200 μl de reagente de trabalho e incube por 30 min a 37 ° C.
(5) Meça a absorbância a 562 nm em um leitor de placas. Subtraia a leitura média de absorbância de pelo menos 3 poços em branco. Desenhe uma curva padrão plotando a leitura de absorbância para cada padrão BSA versus sua concentração. Use a curva padrão para determinar a concentração de proteína de cada amostra desconhecida.
2. Procedimento do tubo de ensaio
(1) Prepare o reagente de trabalho. O reagente de trabalho, líquido claro na cor verde amarelo, é misturado com o Reagente A e o Reagente B na proporção de 50:1.
(2) Prepare o reagente padrão. Diluir o padrão BSA de 5 mg/ml em concentrações laterais de 0, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2 mg/ml. As diluições de BSA podem ser congeladas e armazenadas a –20 °C e descongeladas e aquecidas à temperatura ambiente quando usadas.
(3) Marque os tubos com Padrão ou Teste. Adicione pelo menos 50 μl do Reagente Padrão diluído a cada tubo Padrão e adicione o mesmo volume de amostras de teste em cada tubo de ensaio.
(4) Adicione todos os tubos com 1 ml de reagente de trabalho e incube por 30 min a 37 ° C.
(5) Medir a absorvância a 562 nm com um espectrofotómetro. Subtraia a leitura média de absorbância de pelo menos 3 tubos em branco. Desenhe uma curva padrão plotando a leitura de absorbância para cada padrão BSA versus sua concentração. Use a curva padrão para determinar a concentração de proteína de cada amostra desconhecida.
- Informações adicionais sobre testes
- 1. Se faltar tempo para incubação, os reagentes mistos podem ser aquecidos por microondas em baixa com 20 segundos. Impedidos de ferver violentamente, os reagentes misturados devem ser aquecidos por 10 segundos duas vezes separadamente e balançados levemente na abertura de aquecimento.
2. Usar a mesma proteína com concentração conhecida para preparar o reagente padrão pode aumentar a precisão da determinação da concentração, por exemplo, determinar a concentração de proteína sérica com o reagente padrão de BSA ou determinar a concentração de anticorpos com o reagente padrão de IgG.
- Nota
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- O reagente A é um líquido transparente na cor amarelo claro. Descarte o reagente A que mostra descoloração ou sedimentos.
- Os reagentes do teste de BCA são ligeiramente tóxicos e alcalinos. Por favor, use jaleco e luvas durante os ensaios.
- O kit de ensaio de proteína BCA é intolerante a reagentes redutores ou quelantes de metais. Se esses reagentes forem inevitáveis, o produto FineTest – kit de ensaio de proteína de Bradford está disponível (K002).
