Capturem His-Tagged Purification Large Volume, 4 Units (2 Units per box)

Genômica viral e do hospedeiro

O sequenciamento de todo o genoma do vírus SARS-CoV-2 pode fornecer informações valiosas sobre potenciais epítopos antigênicos que podem desencadear uma resposta imune. O kit SMARTer Stranded Pico v2 da Takara Bio foi usado na China para sequenciar o SARS-CoV-2, fornecendo uma sequência completa do genoma viral. O perfil imunológico de indivíduos infectados ou recuperados com COVID-19 via RNA-seq pode fornecer informações adicionais para alimentar ainda mais o processo de identificação de antígenos e alvos de vacinas. Nossos kits de perfis de BCR e TCR humanos SMARTer altamente sensíveis podem ser usados ​​para monitorar alterações nos repertórios de clonótipos de BCR (receptor de células B) e TCR (receptor de células T)  ao longo da progressão da doença, desde a infecção até a recuperação.

Para purificação de preparação única do RNA SARS-CoV-2 de fluidos corporais e amostras de swab, recomendamos o NucleoSpin RNA Virus , que emprega um protocolo simplificado de 30 minutos. Para processamento de alto rendimento, o NucleoMag Pathogen emprega esferas magnéticas escaláveis ​​e fáceis de automação, com scripts disponíveis para muitas plataformas comuns.

Análise bioinformática

O próximo passo é a análise bioinformática do genoma viral e dos perfis imunológicos do hospedeiro BCR e TCR para revelar os antígenos SARS-CoV-2 e selecionar os alvos da vacina (receptores de superfície viral). O software Takara Bio Immune Profiler pode ser usado junto com o kit de criação de perfil SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L para analisar informações sobre números de clonótipos e informações de sequência V(D)J.

Clonar alvos de vacina

Os pesquisadores podem acelerar a geração de receptor viral e construção de vacina usando gel NucleoSpin e kits de limpeza de PCR e purificação de plasmídeo , bem como nossa tecnologia In-Fusion Snap Cloning para clonagem de alto rendimento:

• Altamente eficiente—mais de 95% de eficiência de clonagem para inserções que variam de 0,5 a 15 kb
• Independente de sequência – clone QUALQUER inserção, em QUALQUER vetor, em QUALQUER locus
• Construção perfeita – sem pares de bases extras (ou sequências de cicatrizes) nas junções de clonagem
• Versátil – clonagem de múltiplas inserções e mutagênese direcionada ao local com um único kit

Os pesquisadores já publicaram trabalhos utilizando a tecnologia In-Fusion HD Cloning em seus fluxos de trabalho para estudar e desenvolver vacinas contra coronavírus , incluindo SARS-CoV-2:

• Abbott , TR et ai. Desenvolvimento do CRISPR como Estratégia Antiviral de Combate ao SARS-CoV-2 e à Influenza. Célula. 181, 865-876 (2020).
• Letko , L., Marzi , A., & Munster, V. Avaliação funcional da entrada de células e uso de receptores para SARS-CoV-2 e outros betacoronavírus da linhagem B. Nat. Microbiol. 6, 562-569 (2020).
• Huo , J., et ai.  Neutralização do SARS-CoV-2 pela destruição do pico de pré-fusão. Hospedeiro celular e micróbio. Em revisão (2020).

Expressar e purificar alvos de vacina

NucleoSpin 96 Plasmid Transfection-grade é uma escolha popular para purificação manual ou automatizada de alto rendimento de construções de expressão. Quando é hora de aumentar a escala, os kits NucleoBond Xtra midi e maxi combinam filtragem de fluxo por gravidade e tecnologia de troca aniônica para fornecer rendimentos mais altos em menos tempo do que as alternativas convencionais. Nosso sistema de expressão de baculovírus BacPAKusa um backbone de baculovírus para expressar sua proteína de interesse para o desenvolvimento de vacinas. Essa tecnologia é fácil de expandir, tem altos níveis de expressão de proteínas e não é patogênica para humanos. Além disso, as proteínas alvo produzidas com este sistema são semelhantes em estrutura, atividade biológica e reatividade imunológica à proteína de ocorrência natural. Uma vez expressas a partir desses construtos purificados, as proteínas candidatas a vacina marcadas com his podem ser rapidamente purificadas usando nossas resinas de cobalto e níquel validadas por desempenho ou nossa revolucionária tecnologia de purificação baseada em membrana de alta capacidade Capturem :

• Fluxo de trabalho rápido e conveniente—protocolo de temperatura ambiente de 5 a 30 minutos usando colunas/placas/dispositivos de filtragem convenientes com membranas com funcionalidade de níquel Capturem
• Alta pureza – pequenos volumes de leito retêm menos contaminantes
• Compatível com uma ampla gama de aditivos, incluindo EDTA, DTT, BME, glicerol, TCEP, etc. ( consulte a tabela de compatibilidade )
• Versátil—fácil purificação de lisados e sobrenadantes de células de mamíferos/bactérias

Os pesquisadores já publicaram trabalhos utilizando nossa tecnologia Capturem His em seus fluxos de trabalho de desenvolvimento de vacinas:

• Do, VT e cols. Adenovírus recombinante carregando um epítopo neutralizante central do vírus da diarreia epidêmica suína e enterotoxina B termolábil de Escherichia coli como vacina de mucosa . Arco. Virol. 165, 609-618 (2020).
• Martínez – Hernández , SL et al. Uma vacina antiamebica: geração do antígeno recombinante LC3 de Entamoeba histolytica ligado à exotoxina A mutada (PEΔIII) através do sistema Pichia pastoris . Biotecnologia . Lett . 39, 1149-1157 (2017).

Imunize camundongos com alvos de vacina, rastreie soros para atividade antiviral e otimize candidatos promissores

Os kits de criação de perfis SMARTer Mouse BCR e TCR da Takara Bio podem ser usados ​​para acelerar o processo de triagem de soros imunológicos para atividade antiviral de vacinas alvo, monitorando alterações nos repertórios de clonótipos de BCR e TCR. As vacinas candidatas promissoras são ainda mais otimizadas analisando e comparando as respostas de anticorpos e células T nos animais vacinados antes e após a exposição ao vírus.

Avaliar a eficácia das candidatas a vacinas finais selecionadas em ensaios clínicos

O monitoramento da resposta imune é fundamental para avaliar a eficácia das vacinas candidatas finais. O perfil do repertório de BCR e TCR por NGS permite o monitoramento preciso de alterações de clonótipos e a identificação de clonótipos específicos de vacinas.