Os kits de linha de células iPS humanas Cellartis contêm células-tronco pluripotentes induzidas (iPS) humanas que são armazenadas e caracterizadas de acordo com os mais altos padrões da indústria, juntamente com um conjunto inicial para o sistema de cultura Cellartis DEF-CS. As células iPS são adaptadas ao Cellartis DEF-CS Culture System, um sistema de cultura completo e fácil de usar para expansão eficiente de células iPS em um ambiente definido e sem alimentador.
Cellartis® Human iPS Cell Line 22 (ChiPSC22) Kit
A linhagem de células iPS humanas 22 da Cellartis é mantida e congelada em meio DEF-CS (vendido como parte do Cellartis DEF-CS Culture System). Recomenda-se descongelar as células no Cellartis DEF-CS 100 Culture System fornecido, um sistema de cultura definido para o crescimento de células iPS humanas indiferenciadas. O sistema de cultura Cellartis DEF-CS 100 inclui meio basal, aditivos e composto de revestimento.
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O Chaperone Plasmid Set consiste em cinco plasmídeos diferentes, cada um dos quais é projetado para expressar múltiplas chaperonas moleculares que funcionam como uma “equipe de chaperone” para permitir o dobramento de proteínas. A co-expressão de uma proteína alvo com uma dessas equipes de chaperonas aumenta a recuperação de proteínas solúveis. Cada plasmídeo carrega uma origem de replicação derivada de pACYC e um gene Cm r , que permite o uso com sistemas de expressão de E. coli utilizando plasmídeos do tipo ColE1 contendo um gene de resistência à ampicilina como marcador. Os genes chaperone estão situados a jusante de um araB ou Pzt-1(tet) promotor. Portanto, a expressão de proteínas alvo e chaperonas pode ser induzida individualmente se o gene alvo for colocado sob o controle de outros promotores (por exemplo, lac ). Esses plasmídeos também contêm o regulador necessário ( araC ou tetr ) para cada promotor.
Use este conjunto para realizar um método de duas etapas para construir sistemas de co-expressão de alvo/chaperona: Na primeira etapa, prepare um hospedeiro E. coli transformado apenas com o plasmídeo chaperona. O segundo passo é preparar células competentes a partir desta nova estirpe e transformar esta estirpe com um plasmídeo que expressa a proteína alvo.
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O kit SMARTer RACE 5’/3′ permite a síntese de cDNA de primeira fita a partir de poli A+ ou RNA total via tecnologia SMART ( S witching Mechanism A t 5′ End of R NA T emplate ) e facilita o desempenho de 5′ – e 3′-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) PCR com o Universal Primer Mix do kit. Nosso SMARTer Oligo cuidadosamente projetado e especialmente modificado captura preferencialmente as extremidades 5′ do cDNA durante a síntese de cDNA. Usando este SMARTer Oligo, nosso procedimento enriquece os pools de cDNA para sequências 5′, aumentando assim a probabilidade de você amplificar toda a sequência do seu gene.
Os produtos RACE PCR são amplificados com a SeqAmp DNA Polimerase fornecida e clonados no vetor linearizado pRACE com In-Fusion HD Cloning. O kit SMARTer RACE 5’/3′ foi aprimorado para acomodar volumes maiores de entrada de RNA e ter melhor desempenho em alvos desafiadores do que o kit de amplificação de cDNA SMARTer RACE original. O In-Fusion HD Cloning Kit, NucleoSpin Gel e PCR Clean-Up Kit e Stellar Competent Cells estão incluídos para sua conveniência na clonagem de produtos RACE. Os primers RACE específicos do gene são fornecidos pelo usuário.
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O meio NDiff 227 é um meio definido, isento de soro, suplementado com N2 e B-27 para diferenciação neural de células-tronco embrionárias (ES) de camundongo em monocultura aderente (Ying et al. 2003). O NDiff 227 também pode ser suplementado para permitir a cultura de células-tronco pluripotentes de longo prazo. A retirada sucessiva dos suplementos resulta na diferenciação na linhagem neural.
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A polimerase de DNA TaKaRa Ex Taq combina o desempenho comprovado da polimerase Takara Taq com a atividade de revisão de uma exonuclease 3′ a 5′ eficiente, para reações de PCR de alta sensibilidade e alta eficiência. Também pode ser usado para PCR de longo alcance (até 20 kb de modelos de DNA genômico e até 30 kb de modelos de DNA lambda). A polimerase Ex Taq tem uma fidelidade maior que a Taq padrão com uma taxa de mutação aproximadamente 4,5 vezes menor, conforme determinado pelo método de Kunkel. A polimerase Ex Taq é fornecida com tampão 10X otimizado (com ou sem Mg 2+ ) e dNTPs.




