O fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos humanos, também conhecido como GM-CSF, ou CSF-2, é uma glicoproteína monomérica secretada por uma variedade de células imunes ativadas, células mesenquimais e células epiteliais. A homologia da sequência de aminoácidos do GM-CSF humano maduro com o GM-CSF de camundongo e rato é de 54% e 63%, respectivamente. O GM-CSF tem múltiplas funções biológicas, como a capacidade de estimular a diferenciação de precursores de células-tronco CD34+ em monócitos, neutrófilos e eosinófilos; Pode atuar como uma quimiocina para neutrófilos e células dendríticas. O GM-CSF também está envolvido na resposta autoimune mediada por células Th1 e Th17 e está relacionado à ativação inflamatória de células dendríticas, microglia, macrófagos alveolares e eosinófilos. Além disso, o GM-CSF regula a proliferação, invasão e metástase de células tumorais por meio de vias imunodependentes e independentes. Este kit usa o Ensaio de Imunoabsorção Enzimática Sanduíche (ELISA) para medir a quantidade de GM-CSF no sobrenadante de soro humano, plasma e cultura de células. A microplaca ELISA no kit é pré-revestida com um anticorpo anti-GM-CSF humano de alta afinidade. A amostra padrão ou de teste e um anticorpo anti-detecção de GM-CSF humano marcado com biotina são adicionados aos poços de microplacas ao mesmo tempo. Após a incubação, o GM-CSF presente na amostra será ligado especificamente ao anticorpo pré-revestido e ao anticorpo de detecção. Após a lavagem, uma estreptavidina marcada com peroxidase de rábano (Streptavidin-HRP) é adicionada aos poços da microplaca e incubada. A biotina e a estreptavidina no anticorpo de detecção produzem o complexo imune “anticorpo revestido-anticorpo humano de detecção de proteína GM-CSF-estreptavidina-HRP” por meio de ligação não covalente de alta resistência. Após a lavagem novamente, o substrato cromogênico TMB é adicionado aos poços. O HRP catalisa o substrato TMB para criar coloração azul, com intensidade positivamente correlacionada com a concentração de GM-CSF na amostra. A reação é interrompida pela adição de solução de parada e a absorbância é medida a 450 nm (comprimento de onda de referência 570-630 nm). Traça-se uma curva padrão para calcular a concentração de GM-CSF na amostra com base no valor de absorvância. Este kit é altamente específico, tem alta sensibilidade de detecção e é conveniente de usar.
Armazenamento
a 2 ~ 8 ° C no escuro por um ano
