Faça Knockdown de seu gene alvo com confiança
O padrão de modificação patenteado para especificidade, combinado com o algoritmo SMARTselection para silenciamento eficiente e garantido do gene alvo, torna o ON-TARGETplus siRNA a escolha premium para knockdown ideal e redução de alvos fora do alvo.
Disponível como reagentes pré-projetados para todo o genoma para humanos, camundongos e ratos.
- Fora do alvo reduzido em até 90% em comparação com o siRNA não modificado
- Silenciamento garantido por SMARTpool e 3 de 4 siRNAs individuais ( consulte a guia Garantia )
- Informações de sequência fornecidas com a compra de siRNA
Tecnologia ON-TARGET plus
Um mecanismo de duas fitas requer uma solução de duas fitas.
Os cientistas e colaboradores da Dharmacon demonstraram em 2006 ( consulte a Referência 1 ) que os alvos de siRNA fora do alvo são mediados por interações de região de semente antisense, iniciando o desenvolvimento de um padrão de modificação de cadeia dupla:
- A fita sense é modificada para evitar a interação com o RISC e favorecer a absorção da fita antisense
- A região da semente da fita antisense é modificada para desestabilizar a atividade fora do alvo e aumentar a especificidade do alvo
A análise da região semente em projetos de siRNA reduz os alvos induzidos por miRNA
Uma publicação histórica ( consulte a Referência 2 ) do grupo de pesquisa Dharmacon foi a primeira a demonstrar experimentalmente o papel fundamental da região de sementes na mediação de alvos fora do alvo. Um artigo subsequente de 2008 ( consulte a Referência 3 ) mostrou a importância da frequência de sementes no 3′ UTR como um indicador de sua probabilidade de causar desvios. Esses princípios foram posteriormente aplicados aos nossos designs de siRNA para melhorar a especificidade:
- Os filtros de design eliminam regiões de semente comuns que provavelmente causam alvos fora do alvo do tipo miRNA
- A análise de frequência de semente para designs de siRNA minimiza os efeitos fora do alvo
Formatos do produto
- SMARTpool : Uma mistura de 4 siRNA fornecida como um único reagente; proporcionando vantagens em potência e especificidade.
- Conjunto de 4 : Uma opção conveniente para comprar alíquotas de todos os 4 siRNAs individuais direcionados a um único gene.
- siRNAs individuais
Componentes para um experimento de RNAi usando siRNA sintético
- ON-TARGETplus siRNA
- Controles positivos e não direcionados apropriados
- Reagente de transfecção DharmaFECT ou eletroporação para entrega
Observação: você pode solicitar o RNA guia acima, com a opção de adicionar qualquer um desses componentes adicionais diretamente ao seu carrinho.
Diretrizes de quantidade do pedido
Os reagentes ON-TARGET plus são rotineiramente usados em concentrações de 5 a 25 nM. Os cálculos abaixo, baseados em 25 nM, são apenas para fins de estimativa e não assumem nenhuma perda de pipetagem.
Número aproximado de reações (poços) a 25 nM de concentração de siRNA | |||
---|---|---|---|
nmol | Placa de 96 poços (volume de reação total de 100 µL) | Placa de 24 poços (volume de reação total de 500 µL) | Placa de 12 poços (volume de reação total de 1000 µL) |
1 | 400 | 80 | 40 |
2 | 800 | 160 | 80 |
5 | 2000 | 400 | 200 |
10 | 4000 | 800 | 400 |
20 | 8000 | 1600 | 800 |
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