SMART-Seq Total RNA Pico Input with UMIs (ZapR Mammalian) User Manual
SMART-Seq® Total RNA Pico Input with UMIs (ZapR® Mammalian) 24 Rxns
R$29.273,13
SMART-Seq Total RNA Pico Input com UMIs (ZapR Mammalian) gera bibliotecas de RNA-seq específicas de fita para sequenciamento Illumina a partir de entradas de 250 pg–10 ng de RNA total purificado ou de 10–1.000 células intactas. O design da biblioteca apresentado neste kit adiciona um identificador molecular exclusivo (UMI) de 8 nucleotídeos (nt) por meio da etapa de transcrição reversa para mitigar o potencial viés de PCR, bem como fornecer informações adicionais para quantificação de transcrição. Material suficiente é fornecido com este kit para realizar até 24 reações.
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O meio NDiff 227 é um meio definido, isento de soro, suplementado com N2 e B-27 para diferenciação neural de células-tronco embrionárias (ES) de camundongo em monocultura aderente (Ying et al. 2003). O NDiff 227 também pode ser suplementado para permitir a cultura de células-tronco pluripotentes de longo prazo. A retirada sucessiva dos suplementos resulta na diferenciação na linhagem neural.
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O Chaperone Plasmid Set consiste em cinco plasmídeos diferentes, cada um dos quais é projetado para expressar múltiplas chaperonas moleculares que funcionam como uma “equipe de chaperone” para permitir o dobramento de proteínas. A co-expressão de uma proteína alvo com uma dessas equipes de chaperonas aumenta a recuperação de proteínas solúveis. Cada plasmídeo carrega uma origem de replicação derivada de pACYC e um gene Cm r , que permite o uso com sistemas de expressão de E. coli utilizando plasmídeos do tipo ColE1 contendo um gene de resistência à ampicilina como marcador. Os genes chaperone estão situados a jusante de um araB ou Pzt-1(tet) promotor. Portanto, a expressão de proteínas alvo e chaperonas pode ser induzida individualmente se o gene alvo for colocado sob o controle de outros promotores (por exemplo, lac ). Esses plasmídeos também contêm o regulador necessário ( araC ou tetr ) para cada promotor.
Use este conjunto para realizar um método de duas etapas para construir sistemas de co-expressão de alvo/chaperona: Na primeira etapa, prepare um hospedeiro E. coli transformado apenas com o plasmídeo chaperona. O segundo passo é preparar células competentes a partir desta nova estirpe e transformar esta estirpe com um plasmídeo que expressa a proteína alvo.
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O sistema de cultura Cellartis DEF-CS 500 é um sistema de cultura completo e fácil de usar para expansão de células iPS definidas e sem alimentador em um formato de monocamada 2D sem colônia.
Com este sistema, as células são mantidas em um estado indiferenciado com praticamente nenhuma diferenciação de fundo, eliminando a necessidade de seleção de células. A natureza altamente reprodutível do sistema, juntamente com sua capacidade de garantir uma taxa de crescimento eficiente e previsível, torna o sistema de cultura DEF-CS ideal para a expansão e ampliação de uma população homogênea de células iPS. Após a reprogramação, a expansão bem-sucedida de suas células-tronco pluripotentes é crucial. O sistema de cultura DEF-CS, um sistema de grau de pesquisa, fornece mídia, um reagente de revestimento e fatores de crescimento para a fácil cultura de células iPS como uma monocamada 2D.
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O kit SMARTer RACE 5’/3′ permite a síntese de cDNA de primeira fita a partir de poli A+ ou RNA total via tecnologia SMART ( S witching Mechanism A t 5′ End of R NA T emplate ) e facilita o desempenho de 5′ – e 3′-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) PCR com o Universal Primer Mix do kit. Nosso SMARTer Oligo cuidadosamente projetado e especialmente modificado captura preferencialmente as extremidades 5′ do cDNA durante a síntese de cDNA. Usando este SMARTer Oligo, nosso procedimento enriquece os pools de cDNA para sequências 5′, aumentando assim a probabilidade de você amplificar toda a sequência do seu gene.
Os produtos RACE PCR são amplificados com a SeqAmp DNA Polimerase fornecida e clonados no vetor linearizado pRACE com In-Fusion HD Cloning. O kit SMARTer RACE 5’/3′ foi aprimorado para acomodar volumes maiores de entrada de RNA e ter melhor desempenho em alvos desafiadores do que o kit de amplificação de cDNA SMARTer RACE original. O In-Fusion HD Cloning Kit, NucleoSpin Gel e PCR Clean-Up Kit e Stellar Competent Cells estão incluídos para sua conveniência na clonagem de produtos RACE. Os primers RACE específicos do gene são fornecidos pelo usuário.