TALON Superflow Metal Affinity Resin, 25 mL

Escolha de condições de purificação nativas ou desnaturantes

A resina TALON retém sua especificidade de ligação à proteína e rendimento sob uma variedade de condições de purificação. É estável sob condições desnaturantes e nativas (não desnaturantes). A decisão de usar condições de purificação nativas ou desnaturantes depende da localização da proteína, solubilidade, acessibilidade da tag his, aplicações a jusante e preservação da atividade biológica.

• Condições nativas

  A purificação de uma proteína em condições nativas é a maneira mais eficiente de preservar sua atividade biológica, mas requer que a proteína seja solúvel. As vantagens incluem:

  • Eliminando a etapa de renaturação no final da purificação, economizando tempo e evitando perda significativa de atividade
  • Mantendo a capacidade de copurificar subunidades enzimáticas, cofatores e proteínas associadas

• Condições de desnaturação

  Como as proteínas que são superexpressas em sistemas procarióticos às vezes formam agregados insolúveis chamados corpos de inclusão, pode ser necessário purificar as proteínas sob condições desnaturantes – usando desnaturantes fortes, como guanidínio 6 M ou ureia 8 M para aumentar a solubilidade da proteína. As vantagens incluem:

  • Solubilização completa de corpos de inclusão e proteínas marcadas com his
  • Ligação melhorada à matriz e ligação não específica reduzida, devido à exposição total da tag his

  Proteínas marcadas com His purificadas sob condições desnaturantes podem ser usadas diretamente em aplicações subsequentes ou podem precisar ser renaturadas e redobradas. A renaturação e redobragem de proteínas podem ser realizadas antes da eluição da coluna. No entanto, os rendimentos de proteínas recombinantes serão menores do que em condições nativas, porque as moléculas de uréia e guanidínio competem com as histidinas pela ligação ao metal.

Uso de agentes redutores

A purificação com resina TALON pode ser realizada na presença de β-mercaptoetanol, mas não DTT ou DTE, para preservar grupos sulfidrila (-SH) reduzidos que são importantes para a atividade biológica e estrutura de uma determinada proteína. TALON fornece rendimentos mais elevados do que Ni-NTA na presença de β-mercaptoetanol.

Recursos

• Exibe alta afinidade para proteínas marcadas com his
• Ideal para aplicações FPLC
• Sem copurificação de proteínas
• Resiste a vazamento de metal
• Executa bem sob uma ampla gama de condições de purificação

Formulários

Proteínas marcadas com his recombinantes purificadas podem ser usadas para:

• Cristalografia
• Ensaios funcionais
• Investigações estruturais
• Outras aplicações

Informações adicionais do produto

Consulte o Certificado de Análise do produto para obter informações sobre as condições de armazenamento, componentes do produto e especificações técnicas. Consulte a Lista de componentes do kit para determinar os componentes do kit. Os Certificados de Análise e as Listas de Componentes do Kit estão localizados na guia Documentos.