Sialic Acid Fluorescence Labeling Kit – 100 Rxns
R$21.851,52
A marcação por fluorescência do ácido siálico com 1,2-diamino-4,5-metilenooxibenzeno (DMB) é um método analítico simples e muito sensível no qual os ácidos siálicos livres são analisados por HPLC de fase reversa após marcação com DMB. Os ácidos siálicos que estão ligados às cadeias de açúcar em glicoproteínas ou glicolipídios também podem ser medidos após pré-tratamento com sialidases ou hidrólise ácida. O limite de detecção do ácido DMB-siálico é de 57 fmol. O kit de rotulagem de fluorescência de ácido siálico da TaKaRa foi projetado para simplificar o procedimento de derivatização de DMB. Os reagentes são fornecidos em soluções aquosas e o protocolo envolve apenas a mistura de reagentes e incubação. Pela combinação deste método DMB com derivatização de Piridilamino (PA), os sialoglicoconjugados podem ser analisados com sensibilidade extremamente alta.
Disponível por encomenda
Mais Informações
Formulários
- Análise quantitativa e altamente sensível de sialoglicoconjugados
- HPLC de ácido siálico
Componentes
| Solução DMB | 2x1ml |
| Solução de Acoplamento* | 2x5ml |
| Neu5Ac (100 µl) | 500 µl |
* Contém 2-mercaptoetanol, hidrossulfito de sódio e ácido acético
Protocolo
- Coloque as amostras contendo ácidos siálicos livres (5 pmol–5 nmol) em tubos de 1,5 ml com tampa de rosca.
NOTA:O volume da amostra deve ser mantido abaixo de 50 µl. Como as condições ácidas são necessárias para a reação a seguir, o pH deve ser neutro ou ácido. - Preparar uma solução mista com uma proporção de Reagente 1:Reagente 2:H 2O de 1:5:4. Adicione 200 µl da solução mista às amostras. Misture os tubos e deixe as reações prosseguirem por 2,5 horas a 50°C, protegidos da luz.
NOTA: A solução mista é estável por pelo menos uma semana a 4°C. - Resfrie os tubos no gelo para terminar as reações.
- Injete 10 µl de cada mistura de reação em uma coluna de HPLC. A quantidade de ácido siálico na amostra pode ser calculada a partir de uma curva de calibração com base na altura do pico obtida com o padrão de ácido siálico definido.
Armazenar
Armazenar a –20°C. Proteja a solução DMB da luz.
Citações de produtos
Hara, S. et al., Determinação de ácidos N-acetilneuramínicos mono-O-acetilados em soros humanos e de ratos por cromatografia líquida de alta eficiência fluorométrica. Anal. Bioquímica . 179, 162-166 (1989).
Klein, A. et al., Novos ácidos siálicos de fontes biológicas identificados por uma abordagem abrangente e sensível: espectrometria de massa de cromatografia líquida-electrospray ionização (LC-ESI-MS) de quinoxalinonas SIA. Glycobiology 7, 421-432 (1997).
Nakamura, M. et ai. , 1,2-Diamino-4,5-metilenodioxibenzeno como reagente fluorogénico altamente sensível para ácidos a-ceto. Química Farmácia. Touro. 35, 687-692 (1987).
Informações adicionais do produto
Consulte o Certificado de Análise do produto para obter informações sobre as condições de armazenamento, componentes do produto e especificações técnicas. Consulte a Lista de componentes do kit para determinar os componentes do kit. Os Certificados de Análise e as Listas de Componentes do Kit estão localizados na guia Documentos.
