Clonagem de Genes
Clonagem de Genes
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O AAVpro Helper Free System (AAV2-CRE Recombinase) é um kit para a preparação de partículas de vírus adeno-associado de sorotipo 2 (AAV2) para entregar um cassete de gene de recombinase Cre para células de mamífero. Este kit permite a preparação de partículas de AAV2 de alto título sem um vírus auxiliar. Simplesmente transfecte os três plasmídeos incluídos em células HEK 293T para preparar o vírus. Este kit também inclui uma solução de extração de AAV para isolamento de vírus eficiente.
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Kit para preparação de partículas de AAV com o sorotipo AAV2, sem o uso de vírus auxiliar. As partículas de AAV produzidas com este sistema podem ser usadas para obter a expressão transitória de genes alvo em células de mamíferos ou animais individuais.
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Os plasmídeos de empacotamento AAVpro (pRC e pHelper) são vendidos separadamente em quantidades muito grandes de 1 mg (AAVpro Packaging Plasmid, Cat. Nºs 6234, 6664, 6665 e 6672), que são convenientes para produção em larga escala para estudos in vivo . Os plasmídeos pRC carregam os genes AAV Rep e Cap . O plasmídeo pHelper contém adenovírus E2A, E4 e VA, genes necessários para a produção eficiente de AAV.
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O Adeno-X Adenoviral System 3 (CMV) fornece os componentes necessários para gerar um sistema de expressão constitutivo em um formato de vetor adenoviral. pAdenoX-CMV (incluído no conjunto de vetores) é um vetor adenoviral pré-linearizado que está pronto para a inserção de seu gene de interesse por meio de nossa tecnologia In-Fusion HD PCR Cloning. Basta amplificar seu gene por PCR e combiná-lo com pAdenoX-CMV em uma reação de clonagem In-Fusion HD. A clonagem HD In-Fusion é rápida, simples, precisa e eficiente, tornando o Adeno-X Adenoviral System 3 a ferramenta de entrega de genes adenoviral mais avançada comercialmente disponível.
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O Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) é um sistema completo para clonagem e expressão de um RNA guia único alvo (sgRNA) para estudos de modificação genética de mamíferos usando a tecnologia CRISPR/Cas9. O vetor pGuide-it-ZsGreen1 é usado para expressar simultaneamente Cas9, um sgRNA específico do alvo, e a proteína fluorescente excepcionalmente brilhante ZsGreen1. O vetor é pré-linearizado para inserção simples de uma sequência alvo para expressão de sgRNA do promotor U6 humano; Cas9 nuclease e ZsGreen1 são coexpressos a partir de um promotor CMV bidirecional. Este kit também contém todos os componentes necessários para a clonagem, incluindo mistura de ligação, controles necessários e células Stellar Competent.
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O kit de construção de biblioteca de cDNA direcional SMARTer In-Fusion fornece um método sensível e eficiente para a produção de bibliotecas de cDNA completas e de alta qualidade. O kit utiliza duas de nossas tecnologias mais inovadoras: A tecnologia SMART ( S witching M echanism A t 5′ end of RNA T ranscript) acoplada à amplificação por PCR torna possível gerar altos rendimentos de cDNA de fita dupla de comprimento total a partir de nanogramas de A +ou RNA total. A tecnologia de clonagem In-Fusion facilita a clonagem de sua biblioteca de cDNA SMARTer em qualquer local dentro de qualquer vetor. Você pode usar o vetor linearizado pSMART2IFD incluído no kit, ou qualquer vetor de sua escolha, para clonar sua biblioteca. Clones isolados de bibliotecas acabadas podem ser transferidos diretamente para qualquer vetor de expressão linearizado para análise funcional – sem a necessidade de locais de restrição compatíveis.
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O In-Fusion Snap Assembly Master Mix foi projetado para clonagem rápida e direcional de um ou mais fragmentos de DNA em qualquer vetor. Essa master mix funde fragmentos de DNA (por exemplo, sequências geradas por PCR e vetores linearizados) de forma eficiente e precisa ao reconhecer uma sobreposição de 15 pb em suas extremidades. Essa sobreposição de 15 pb pode ser projetada nos primers projetados para amplificação por PCR das sequências desejadas. In Fusion Snap Assembly Master Mix oferece alta eficiência, mesmo para aplicações que podem ser desafiadoras, incluindo a clonagem de fragmentos longos, oligonucleotídeos curtos e fragmentos múltiplos.
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O Sistema de Expressão Lenti-X permite que você produza títulos excepcionalmente altos de lentivírus recombinante para expressão de qualquer cDNA em qualquer tipo de célula suscetível à transdução de lentivírus. O sistema de empacotamento Lenti-X é uma combinação proprietária de plasmídeos que expressa coletivamente todas as proteínas virais necessárias para o empacotamento de alta eficiência de transcritos de vetores lentivirais em partículas infecciosas de lentivírus. Lenti-X Packaging Single Shots, que contêm plasmídeos de embalagem Lenti-X liofilizados e reagente de transfecção, são usados para a introdução eficiente da mistura de embalagem e do vetor pLVX-Puro em células 293T com eficiência muito alta. Os efeitos combinados desses componentes permitem que as células 293T produzam sobrenadantes lentivirais incompetentes de replicação de alto título para uma transdução segura de praticamente qualquer tipo de célula. O Lenti-X GoStix pode ser usado para determinar se a produção de vírus está dentro de um intervalo utilizável ou para selecionar o melhor momento para coletar seu vírus. O sistema fornece reagentes suficientes para 16 reações de embalagem.
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Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal) permite a produção simplificada de lentivírus de alto título pseudotipado com sua proteína de pico SARS-CoV-2 de interesse, fornecendo tubos únicos pré-aliquotados, liofilizados de Xfect Transfection Reagent pré-misturado com uma formulação otimizada de plasmídeos de embalagem lentiviral Lenti-X. A produção de pseudovírus envolveu simplesmente diluir um vetor de expressão variante de pico SARS-CoV-2 e seu vetor de transferência de escolha em água, adicionar a um tubo de doses únicas e aplicar a mistura a células 293T (por exemplo, Lenti-X 293T Cells, Cat. # 632180) em um prato de 10 cm.
Cada kit inclui 16 tubos de Lenti-X Packaging Single Shots (Sem envelope; Cat. # 631297), o vetor pEmpty (Cat. # 631298) para clonagem e expressão da proteína de pico SARS-CoV-2 desejada, o Lenti- X SARS-CoV-2 Spike Vector Set (Cat. # 631296), que inclui três plasmídeos que codificam as variantes de pico SARS-CoV-2 truncada D614G, B.1.1.7 e B.1.351 e o Lenti-X Reporter Vector Set (Cat. # 632677). Cat. # 632677 inclui dois vetores de transferência lentiviral auto-inativados que codificam ZsGreen1 e luciferase de vaga-lume, respectivamente, sob o promotor CMV, para serem usados como repórteres para transdução viral.
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PROPÓSITOExpressão bacteriana da nuclease Cas9, tracrRNA e guia crRNA
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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PROPÓSITOpara e. coli, TALEN compatível com Golden Gate incorporado com N Terminal 6xHIS Tag, Codon Optimized FokI
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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PUBLICAÇÃO
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INFORMAÇÃO DE SEQUÊNCIA
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PROPÓSITOpara e. coli, TALEN compatível com Golden Gate incorporado com C Terminal 6xHIS Tag, Codon Optimized FokI
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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PUBLICAÇÃO
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INFORMAÇÃO DE SEQUÊNCIA
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PROPÓSITOExpressão de RNA guia personalizável (gRNA) para knockdown de gene bacteriano
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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PROPÓSITOexpressão bacteriana de uma variante EosFP, mEos2 (uma proteína fluorescente fotoconversível)
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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INFORMAÇÃO DE SEQUÊNCIA
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PROPÓSITOExpressão induzível por aTc de Cas9 de tipo selvagem (S.pyogenes) para knockdown de gene bacteriano
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LABORATÓRIO DE DEPÓSITO
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Este primer é uma mistura de desoxirribonucleotídeos de sequência aleatória de 9 meros (teoricamente 4 9 sequências) com uma extremidade 5′ fosforilada. O 9 mer pd(N)9 (50 nmol) corresponde a aprox. 150 μg, 5 DO.
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RetroNectin é uma fibronectina humana recombinante (CH-296) que consiste em três domínios funcionais: o domínio de ligação à célula da fibronectina humana (domínio C), domínio de ligação à heparina (domínio H) e domínio de sequência CS-1. O vetor retroviral recombinante contendo RetroNectin é frequentemente usado para melhorar a eficiência de transdução durante a transferência de genes de células de mamíferos. Isso ocorre porque a molécula de RetroNectin permite a proximidade entre o vetor retroviral de ligação ao domínio H e a célula animal transduzida, que tem uma forte afinidade pelo domínio C de RetroNectin. Além disso, RetroNectin é uma matriz de revestimento eficaz para instrumentos e utensílios de laboratório usados para expandir linfócitos ex vivo .
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O kit de construção de biblioteca de cDNA direcional SMARTer In-Fusion fornece um método sensível e eficiente para a produção de bibliotecas de cDNA completas e de alta qualidade. O kit utiliza duas de nossas tecnologias mais inovadoras: A tecnologia SMART ( S witching M echanism A t 5′ end of RNA T ranscript) acoplada à amplificação por PCR torna possível gerar altos rendimentos de cDNA de fita dupla de comprimento total a partir de nanogramas de A +ou RNA total. A tecnologia de clonagem In-Fusion facilita a clonagem de sua biblioteca de cDNA SMARTer em qualquer local dentro de qualquer vetor. Você pode usar o vetor linearizado pSMART2IFD incluído no kit, ou qualquer vetor de sua escolha, para clonar sua biblioteca. Clones isolados de bibliotecas acabadas podem ser transferidos diretamente para qualquer vetor de expressão linearizado para análise funcional – sem a necessidade de locais de restrição compatíveis.
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Stellar Competent Cells (dam-/dcm-) são uma cepa de E. coli HST04 que não possui os fatores genéticos (dam e dcm) necessários para a metilação do DNA. Os plasmídeos preparados com este produto podem ser cortados por enzimas de restrição que são normalmente bloqueadas por metilação de dam ou dcm. Uma mutação dupla dam/recA é letal, então a cepa parental é recA+. Portanto, segue-se que a transformação do DNA extracelular com sequências repetidas pode resultar em recombinação por recA. Este produto não é um hospedeiro de clonagem adequado. Para transformação, é altamente recomendável usar este produto para construir plasmídeos como mencionado acima. Um vetor pUC19 é fornecido, bem como o meio SOC.
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Stellar Competent Cells é uma cepa de E. coli HST08 que fornece alta eficiência de transformação. Essas células podem ser usadas em uma ampla variedade de aplicações – desde a preparação de cDNA e bibliotecas genômicas, até a construção de bibliotecas genômicas de comprimento maior, subclonagem e até mesmo clonagem de DNA metilado. As células estelares competentes não possuem o agrupamento de genes para cortar DNA metilado estranho ( mrr-hsdRMS-mcrBC e mcrA ) e, portanto, são úteis para clonar DNA metilado. As células também podem ser usadas para triagem azul/branco (isto é, complementação α) quando transformadas com vetores contendo o gene lacZα . Este pacote inclui 50 tubos de células competentes (100 ul/tubo), meio SOC e um vetor pUC19.