- Conteúdo do kit
-
Tempos de extração 500T 2500T Armazenamento Eu. Reagente de trabalho 100 ml 500 ml RT II. BSA (5 mg / ml) 2 ml 10 ml -20°C - Armazenamento
- Armazenar em temperatura ambiente por um ano, exceto BSA a -20 ° C.
- Procedimento
- 1.96-Procedimento de microplaca
(1) Prepare o reagente padrão. Diluir o padrão BSA de 5 mg/ml em concentrações laterais de 0, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5 mg/ml. As diluições de BSA podem ser congeladas e armazenadas a –20 °C e descongeladas e aquecidas à temperatura ambiente quando usadas.
(2) Marque os poços com Padrão ou Teste. Adicione pelo menos 10 μl do Reagente Padrão diluído a cada poço Padrão e adicione o mesmo volume de amostras de teste em cada poço de teste.
(3) Adicione todos os poços com 200 μl de reagente de trabalho e balance levemente para misturar.
(4) Meça a absorbância a 595 nm em um leitor de placas. Subtraia a leitura média de absorbância de pelo menos 3 poços em branco. Desenhe uma curva padrão plotando a leitura de absorbância para cada padrão BSA versus sua concentração. Use a curva padrão para determinar a concentração de proteína de cada amostra desconhecida.
2. Procedimento do tubo de ensaio
(1) Prepare o reagente padrão. Diluir o padrão BSA de 5 mg/ml em concentrações laterais de 0, 0,25, 0,5, 0,75,
1, 1,5 mg/ml. As diluições de BSA podem ser congeladas e armazenadas a –20 °C e descongeladas e aquecidas à temperatura ambiente quando usadas.
(2) Marque os tubos com Padrão ou Teste. Adicione pelo menos 30 μl do Reagente Padrão diluído a cada tubo Padrão e adicione o mesmo volume de amostras de teste em cada tubo de ensaio.
(3) Adicione todos os tubos com 1 ml de reagente de trabalho e agite levemente para misturar.
(4) Medir a absorvância a 595 nm com um espectrofotómetro. Subtraia a leitura média de absorbância de pelo menos 3 tubos em branco. Desenhe uma curva padrão plotando a leitura de absorbância para cada padrão BSA versus sua concentração. Use a curva padrão para determinar a concentração de proteína de cada amostra desconhecida.
- Informações adicionais sobre testes
- Usar a mesma proteína com concentração conhecida para preparar o Reagente Padrão pode aumentar a precisão da determinação da concentração, por exemplo, determinar a concentração de proteína sérica com o Reagente Padrão de BSA ou determinar a concentração de anticorpos com o Reagente Padrão de IgG.
- Nota
- 1. Embora os reagentes armazenados a 4 ° C raramente precipitem, uma pequena quantidade de precipitação é aceitável e pode ser resolvida invertendo o recipiente.
2. Os reagentes do teste de Bradford são altamente ácidos. Por favor, use jaleco e luvas durante os ensaios por considerações de segurança.
3. O kit de ensaio de proteína Bradford fino é intolerante a reagentes detergentes. Se os reagentes detergentes forem inevitáveis, o produto FineTest – Kit de ensaio de proteína BCA fino está disponível (K001).