Platus Taq DNA Polymerase (recombinante), 500 units
R$328,02
Platus Taq é uma polimerase de DNA altamente
termoestável da bactéria termófila Thermus aquaticus. A
enzima catalisa a síntese de DNA 5′-3′, não tem atividade
revisora detectável 3′-5′. Além disso, a Platus Taq DNA
polimerase exibe atividade que resulta na adição de
adeninas adicionais na extremidade 3′ dos produtos de
PCR. É ideal para a PCR padrão de amplificação de
produtos até 5 kb.
Aplicações
• Amplificação por PCR de rotina de fragmentos de até
5 kb.
• Geração de produto de PCR para clonagem TA.
• Rotulagem de DNA.
• Sequenciamento de DNA.
Fonte
Células de E.coli com um gene pol clonado da Thermus
aquaticus YT1.
Definição de Unidade
Uma unidade da enzima a incorporração de 10 nmol de
desoxirribonucleotídeos em uma fracção polinucleotidica
(adsorvido DE-81) em 30 min a 70°C.
A atividade da enzima é testada na seguinte mistura: 67 mM
Tris-HCl (pH 8.8 a 25°C), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-
mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/mL BSA, 0.75 mM
activated salmon milt DNA, 0.2 mM de cada dNTP, 0.4
MBq/mL [3H]-dTTP.
Tampão de Armazenamento
A enzima é fornecida com: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM
DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet® P40,
0.5% (v/v) Tween® 20 e 50% (v/v) glicerol.
Data Sheet – S1104 Platus Taq DNA Polymerase
Concentração de Magnésio
A concentração de MgCl2 em geral estabiliza complexos de
primers e amostra. Devido à ligação de MgCl2 com dNTPs,
primers e amostras de DNA, a concentração precisa ser
otimizada para o rendimento máximo da PCR. A gama de
concentrações recomendada é de 1-4 mM. Se a
concentração de Mg é demasiado baixa, o rendimento do
produto de PCR pode ser reduzido. No caso de
concentrações muito altas, os produtos de PCR não
específicos podem aparecer e a fidelidade da PCR pode ser
reduzida. A Platus Taq DNA polimerase é fornecida com
dois tampões: tampão com KCl e tampão com (NH4)2SO4.
Para a PCR padrão com Taq DNA polimerase e dNTPs 0,2
mM as concentrações de MgCl2 recomendadas são, em
geral, inferior a 1,5 ± 0,25 mM e se utiliza o tampão com
KCl. Para concentrações de MgCl2 com 2,0 ± 0,5 mM se
utiliza o tampão com (NH4)2SO4.
10X Tampão Taq com KCl
100 mM Tris-HCl (pH 8.8 a 25°C), 500 mM KCl, 0.8% (v/v)
Nonidet P40.
10X Tampão Taq com (NH4)2SO4
750 mM Tris-HCl (pH 8.8 a 25°C), 200 mM (NH4)2SO4, 0.1%
(v/v) Tween 20.
Inibição e inativação
Inibidores: detergentes iônicos (desoxicolato, sarkosyl e
SDS) em concentrações maiores do que 0.06, 0.02 e 0.01%,
respectivamente.
Inativado por extração com fenol/ clorofórmio.
