SYBR Green qPCR Mix(2X), 1mL
R$838,60
SYBR Green qPCR Mix (2X) é uma solução pré-misturada de alta qualidade para PCR quantitativo em tempo real, ou seja, qPCR (PCR quantitativo) ou PCR em tempo real, que é usado principalmente para detecção quantitativa ultrassensível específica de cDNA e DNA genômico.
SYBR Green qPCR Mix (2X) usa SYBR Green I como corante. SYBR Green I é um corante fluorescente verde que se liga à região sulco de dupla hélice do DNA de fita dupla. A fluorescência do SYBR Green I é fraca no estado livre e sua fluorescência é muito aumentada quando está ligada ao DNA de fita dupla. Desta forma, a quantidade de DNA de fita dupla produzida pela amplificação por PCR pode ser detectada quantitativamente pela detecção da intensidade da fluorescência.
A Taq DNA Polimerase usada na polimerase é uma enzima termostarter de alta qualidade que se liga a anticorpos, permitindo um thermostarter conveniente e eficiente. A enzima Taq se liga a anticorpos monoclonais anti-enzima Taq, inibindo assim a atividade da DNA polimerase da enzima Taq, o que efetivamente evita a amplificação não específica causada pelo recozimento não específico do primer e do DNA molde ou dímeros de primer em baixas temperaturas. Na etapa de pré-desnaturação da reação de PCR, o anticorpo será aquecido para inativar, o que pode garantir que a atividade da enzima Taq seja liberada somente após a pré-desnaturação, e nenhuma polimerização de DNA ocorrerá antes da pré-desnaturação, melhorando muito a especificidade, sensibilidade e precisão da detecção quantitativa da reação de PCR.
Este produto contém todos os componentes comuns, como Taq DNA Polimerase, PCR Buffer, dNTPs, corante fluorescente SYBR Green I, estabilizador e íon de magnésio, facilitando a operação e o uso. Os usuários só precisam adicionar seus próprios primers, amostras de DNA e água deionizada.
Este produto não contém ROX e é adequado para instrumentos de PCR quantitativos fluorescentes que não requerem ROX como corante de correção.
Para o ensaio qPCR convencional de 96 poços (o sistema de reação recomendado é de 20μl), 100 testes podem ser realizados por ml; Se usado para um ensaio qPCR convencional de 384 poços (recomenda-se 10μl), este produto pode realizar 200 testes.
Disponível por encomenda
- Tamanho
- 1mL
- Armazenamento
- O kit deve ser armazenado a -20°C longe da luz por um ano; Conservar a 4°C ao abrigo da luz durante um mês. Tente evitar o congelamento e descongelamento repetidos.
- Procedimento de ensaio
- 一. O sistema de reação PCR foi criado:
1. Derreta e misture as soluções necessárias para a reação de PCR. Coloque o SYBR Green qPCR Mix(2X) sobre um banho de gelo ou em uma caixa de gelo.
2.Consulte a tabela abaixo para configurar o sistema de reação PCR em condições de banho de gelo. (placa de 96 poços como exemplo)
Reagentes volume (μL) Água livre de RNase 6 DNA do modelo 2 Mistura de primer (3μM cada) 2 Mistura de qPCR verde SYBR (2X) 10 Volume total 20 Nota: Bons resultados de detecção podem ser obtidos quando a concentração final do primer é de 0,2-0,5 μM, e a concentração final do primer pode ser ajustada na faixa de 0,1-1,0 μM de acordo com a situação. Normalmente, a quantidade de molde de DNA é 1-10ng cDNA ou 10-100ng DNA genômico como quantidade de referência. Como o modelo de diferentes espécies contém um número diferente de cópias do gene alvo, se necessário, o modelo pode ser diluído em gradiente para determinar o uso ideal do modelo. Quando o cDNA obtido por reação RT-PCR é usado diretamente como molde, a quantidade adicionada não deve exceder 10% do volume total da reação de PCR.
3. Sopre suavemente e misture com uma pipeta, centrifugue em temperatura ambiente por alguns segundos.
4. Coloque o líquido de reação de PCR no instrumento de PCR para iniciar a reação de PCR.
二.A configuração dos parâmetros de reação de PCR:
A pré-desnaturação do molde é realizada antes da reação de PCR em tempo real, geralmente definida em 95 ° C por 2 minutos, com modelos de GC complexos ou altos adequadamente estendidos para 5 minutos. A Taq DNA Polimerase neste produto pode completar a amplificação de pelo menos 300bp em 15 segundos, o que pode atender à maioria dos experimentos de qPCR. Para amplicons com mais de 350 pb ou alto conteúdo de GC, recomenda-se aumentar o tempo de extensão para 60 segundos ou usar o método de três etapas para melhorar a eficiência da amplificação.
PASSO 1 (desnaturação inicial): 95 °C 2min
PASSO 2 (desnaturação): 95 °C 15 seg
PASSO 3 (recozimento / extensão): 60 °C 15-30seg
PASSO 4 (ciclo): Vá para o PASSO 2 por 40 ciclos
Nota: O método de três etapas requer apenas uma etapa de 72 °C 30 segundos após o recozimento/extensão.
三.Detecção de resultados
Os resultados foram analisados por meio do software fornecido pelo instrumento de PCR quantitativo de fluorescência.
- Anotações
- 1. Preste atenção à temperatura de recozimento do primer. Quando a temperatura de recozimento é de <60 °C, recomenda-se a amplificação de PCR em três etapas.
2. Este produto contém corante fluorescente SYBR Green I. Ao armazenar este produto ou configurar a reação de PCR, evite a irradiação de luz forte para evitar a extinção da fluorescência o máximo possível.
3. Para fragmentos amplificados com mais de 350bp ou alto teor de GC, recomenda-se aumentar o tempo de extensão para 60 segundos ou adotar o método de três etapas para melhorar a eficiência da amplificação.
4. A detecção de qPCR é uma detecção ultrassensível, e a área de configuração da reação de PCR deve tentar evitar toda a possível contaminação dos produtos a serem amplificados. Os produtos de PCR devem ser selados e descartados para evitar a contaminação do ambiente experimental com concentração ultra-alta de produtos de PCR.
5. Embora este produto ainda tenha quase o mesmo efeito de amplificação de PCR após 10 vezes de congelamento e descongelamento repetidos, ainda é apropriado evitar o congelamento e descongelamento repetido deste produto, o congelamento e descongelamento repetido pode degradar o desempenho do produto.
6. Este produto é apenas para uso de pesquisadores científicos, não pode ser usado para diagnóstico ou tratamento clínico, alimentos ou medicamentos, não deve ser armazenado em residências comuns.
7. Para sua segurança e saúde, use boas roupas e luvas descartáveis.
