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Trypsin, TPCK Treated, 1 gm

R$7.497,00

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de aminoácidos de lisina e arginina. Se um resíduo de prolina estiver no lado carboxílico do local de clivagem, a clivagem não ocorrerá. Se um resíduo ácido estiver em ambos os lados do sítio de clivagem, a taxa de hidrólise mostrou ser mais lenta.

Composição:

O tripsinogênio pode ser ativado pela remoção de um hexapeptídeo terminal para produzir β-tripsina de cadeia simples. A autólise limitada subsequente produz outras formas ativas com duas ou mais cadeias peptídicas ligadas por pontes dissulfeto. As formas predominantes são a α-tripsina, com duas cadeias peptídicas e a β-, uma única cadeia. Diferentes atividades e estabilidade térmica são mostradas por α- e β-tripsina. 

Outras características estruturais incluem alças de superfície nos aminoácidos 185-193, que influenciam a especificidade, apesar de não fazerem contato direto com o substrato. Um sítio de ligação de Ca2+ de alta afinidade é necessário para estabilidade e, quando não está presente, ocorre autólise. A alça de autólise (localizada nos aminoácidos 143-151) é muito flexível em tripsina e tripsinogênio. A clivagem na lisina produz a forma alfa que retém alguma atividade catalítica. A proteína tem seis ligações dissulfeto completamente conservadas (Halfon e Craik 1998).

Características moleculares:

O pâncreas bovino expressa duas formas de tripsina, a forma catiônica dominante e a aniônica menor. Essas sequências de proteínas compartilham 72% de identidade, enquanto suas regiões de codificação compartilham 78% de identidade. 

Cada uma dessas proteínas é processada em formas alternativas. A tripsina catalítica contém uma “alça de autólise” flexível (resíduos G145-V157) (Schroeder e Shaw 1968, e Bartunik et al. 1989), e autólise da forma B-tripsina de cadeia única dominante em K148-S149 dentro desta alça para a formação de A-tripsina. Mais autólise em K193-D194 leva à formação de Psi-tripsina (Fehlhammer e Bode 1975).

As proteínas tripsina catiônica e aniônica são expressas como proenzimas de tripsinogênio, com um peptídeo sinal de 15 resíduos (M1-A15) e um propeptídeo de 8 resíduos (F16-K23). A dobra tridimensional de todas as tripsinas conhecidas é altamente conservada. Além disso, a tríade catalítica e as regiões que flanqueiam a tríade catalítica são altamente conservadas (Hartley 1970).

Disponível por encomenda

SKU: LS003744 Categoria: Tag:
Tripsina, tratada com TPCK
Um pó liofilizado, diafiltrado e cromatograficamente purificado que foi tratado com L-(tosilamido-2-fenil) etil clorometilcetona (TPCK) para inibir a atividade quimiotríptica contaminante [Kostka, V., e Carpenter, F.: JBC , 239, 1799 (1964)].
Armazenar a 2-8°C. PROTEGER DA UMIDADE.
≥ 180 unidades por mg de proteína (10.350 BAEE / 3.450 unidades USP / NF por mg de proteína)

Número de Acesso à Proteína:  P00760

Classificação CATH (v. 3.2.0):

  • Classe: Principalmente Beta
  • Arquitetura: Barril Beta
  • Topologia: Trombina, subunidade H

Peso Molecular:  23,3 kDa (Teórico)

pH ideal:  7,5-8,5 (Koutsopoulos et al. 2007)

Ponto de isolação eletrica:

  • Tripsinogênio: pH 9,3 (Walsh e Neurath 1964)
  • Tripsina: pH 10,5 (Cunningham 1954).

Coeficiente de Extinção:  Tripsinogênio: 45.250 cm -1  M -1 >

Resíduos do site ativo:

  • Histidina (H63)
  • Ácido aspártico (D107)
  • Serina (S200)

Ativadores:  A taxa de conversão do tripsinogênio é aumentada pelo uso de lantanídeos no lugar dos íons de cálcio (Gomez et al. 1974).

Inibidores:

  • Inibidores de tripsina pancreático, soja, feijão-de-lima e clara de ovo (ver seção sobre Inibidores de tripsina)
  • DFP
  • Aprotinina
  • Ag +
  • Benzamidina
  • EDTA

         (Branco e Branco 1997)

Formulários:

  • Dissociação tecidual, especialmente quando combinada com outras enzimas, como colagenase e elastase
  • Colheita de células por “tripsinização”
  • Isolamento de mitocôndrias
  • estudos in vitro de proteínas
  • Removendo monocamadas de células de plástico e vidro
  • Vários procedimentos de hemaglutinação
  • Preparação de amostra para análise de DNA por citometria de fluxo
  • Mapeamento tríptico
  • Trabalho de impressão digital e sequenciamento
  • Monitoramento ambiental
  • Redução da densidade celular na cultura de tecidos
  • Subcultura de células
  • Proteínas de fusão de clivagem
  • Gerando glicopeptídeos a partir de glicoproteínas purificadas 

(Branco e Branco 1997)

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